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高效液相色譜進樣器的分類及使用注意事項   

2021-03-02 [98]
 高效液相色譜早期使用隔膜和停流進樣器,裝在色譜柱入口處,現在大都使用六通進樣閥或自動進樣器。進樣裝置要求:密封性好,死體積小,重複性好,保證中心進樣,進樣時對色譜係統的壓力、流量影響小。
  HPLC進樣方式可分為:隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。
  1.隔膜進樣。用微量注射器將樣品注入專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內,可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎等於零,可以獲得的柱效,且價格便宜,操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附樣品產生記憶效應,使進樣重複性隻能達到1~2%;加之能碉各種溶劑的橡皮不易找到,常規分析使用受到限製。
  2.停流進樣。可避免在高壓下進樣。但在HPLC中由於隔膜的汙染,停泵或重新啟動時往往會出現“鬼峰”,另一缺點是保留時間不準。在以峰的始末信號控製餾分收集的製備色譜中,效果較好。
  3.閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥,其關鍵部件由圓形密封墊子(轉子)和固定底座(定子)組成。由於閥接頭和連接管死體積在存在,柱效率低於隔膜進樣(約下降5~10%左右),但耐高壓(35~40MPA),進樣量準確,重複性好(0.5%),操作方便。
  六通閥進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。
  ①用部分裝液法進樣時,進樣量應不大於定量環體積的50%(多75%),並要求每次進樣體積準確、相同。此法進樣的準確度和重複性決定於注器取樣的熟練程度,而且易產生由進樣引起的峰展寬。
  ②用完全裝液法進樣時,進樣量應不小於定量環體積的5~10倍(少3倍),這樣才能完全置換定量環內和流動相,消除管壁效應,確保進樣的準確度及重複性。
  六通閥使用和維護注意事項
  ①樣品溶液進樣前必須用0.45UM濾膜過濾,以減少微粒對進樣閥的磨損。
  ②轉動閥芯時不能太慢,更不能停留在中間位置,否則流動相受阻,使泵內壓力劇增,甚至超過泵的大壓力;轉到進樣位時,過高的壓力將使柱頭損壞。
  ③為防止緩衝鹽和樣呂殘留在進樣閥中,每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗,或先用能溶解樣品的溶劑衝洗,再用水衝洗。
  4.自動進樣。用於大量樣品的常規分析。